Técnicas+microbiológicas+para+el+diagnóstico+de+las+infecciones+orales.

**Técnicas microbiológicas para el diagnóstico de las infecciones orales.**

Toma de muestras. Transporte de muestras microbiológicas. **(Ana Fernández Ibáñez)** Medios de cultivo específicos y condiciones de cultivo bacteriano. Exámen microscópico. **(Ángel Pérez Álvarez) ** Técnicas de identificación bacteriana: Identificación clásica, sistemas multitest y técnicas genéticas de identificación. Pruebas de inmunodiagnóstico. **(César Fernández García)** Diagnóstico microbiológico en micología y virología oral **(Humera Safir)**


 * Toma de muestras. Transporte de muestras microbiológicas. (Ana Fernández Ibáñez) **

__TOMA DE MUESTRAS: __

En la toma de muestras hay que tener en cuenta unas recomendaciones generales que cumplan entre otras, las normas de bioseguridad para las muestras y el bienestar de los trabajadores de la salud. Por ello es imprescindible el lavado de manos y el empleo de guantes a la hora de manipular líquidos u otras partículas corporales. Así mismo son útiles el empleo de mascarillas y gafas en aquellos casos en que exista riesgo de salpicaduras durante la toma o recogida de una muestra biológica. El material empleado debe cumplir todas las condiciones asepticas y el paciente debe estar informado del procedimiento. Hay situaciones en que es conveniente la toma de muestras junto a la cama del enfermo (hemocultivos, LCR), en otras es imprescindible realizarla en el propio laboratorio (ex. genitales que requieren observación en fresco).

Principios generales para la toma de muestras:  Cada tipo de muestra necesita un material estéril para su recogida y un medio de transporte para ser enviada al laboratorio
 * La toma debe efectuarse en el sitio exacto de la lesión con las máximas condiciones de asepsia
 * La muestra nunca se pondrá en contacto con antisépticos o desinfectantes
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">La toma se realizará lo más rápido posible
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Se prefieren siempre los productos purulentos frescos líquidos, recogidos por aspiración directa con jeringa a las muestras tomadas por hisopos o torundas con algodón
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Todas las muestras deben recogerse antes de la instauración del tratamiento antibiótico

<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**SANGRE VENOSA** __ <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Las muestras venosas se obtienen directamente del área ante cubital o también de un acceso venoso central instaurado en el paciente. Para ello se selecciona la vena y se aplica el torniquete por encima de la porción a puncionar. Se limpia la piel con un algodón impregnado en solución antiséptica (alcohol de 70º) durante un mínimo de 30 segundos o una solución de yodo aplicada en forma circular del centro a la periferia. Se punciona la piel con el bisel hacia arriba y se coloca el tubo de recolección de muestra. Se extraerán 20-30 cc en adultos aunque conviene utilizar jeringas que lleven 5-10 cc más de los que se precisan puesto que se realiza con más facilidad la extracción. Inocular los tubos para evitar la coagulación de la sangre agitándolos suavemente e invirtiéndolos. Una vez acabado se suelta el torniquete, se retira la aguja y se hace presión con la ayuda de un algodón sobre la zona puncionada hasta que deje de salir la sangre.

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**SANGRE ARTERIAL** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Existen dos procedimientos de obtención de sangre arterial; Directamente o con la ayuda de un catéter pero el procedimiento es parecido al anterior.

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**SANGRE CAPILAR** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">En este caso basta con puncionar el pulpejo de los dedos de las manos o pies. Es de utilidad en niños y en situaciones concretas de adultos como pueda ser la realización de una glucometría. Para ello se selecciona el sitio a puncionar, se limpia la zona con una solución antiséptica, se punciona la zona elegida y se hace presión moderada para obtener la muestra. El resto se lleva a cabo como procedimientos anteriores.

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**FLUIDOS CORPORALES** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Los fluidos corporales que se envían más comúnmente al laboratorio para ser analizados son: líquido pleural, líquido sinovial, líquido amniótico, líquido pericárdico, líquido peritoneal, aspirado gástrico y líquido cefalorraquídeo. <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para ellos se emplea una técnica estéril excepto en el caso de la toma gástrica. <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Se necesita la colaboración de una enfermera que ayude al medico durante el procedimiento.

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**ÚLCERAS Y** **HERIDAS SUPERFICIALES** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> Consideraciones para la toma de muestras:
 * Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
 * Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando con preferencias de zonas profundas
 * Si la muestra es insuficiente, instilar suero fisiológico y aspirarlo nuevamente en la jeriga
 * Si los procedimientos anteriores no son factibles, se efectuará un frotis de las partes profundas de la herida con una torunda

Para muestras líquidas se intentará obtener de 1-10 cm3. Si esto no fuera posible, se enviará la máxima cantidad posible.

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR** __ <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">__**Exudado faringo-amigdalino**__.- La obtención de la muestra se realiza con la ayuda de un depresor lingual y bajo visión directa, se tocará con la torunda en todas las partes con exudado, membranas o inflamación. No se debe tocar nunca la mucosa oral, lengua o úvula.

__**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Nasofaringe **__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">.- Es la muestra idónea para la investigación de //Bordetella//. La toma se realiza pasando con suavidad la torunda flexible de alginato cálcico a través de la nariz hasta llegar a la nasofaringe, se rota la torunda y la extraemos. Se utilizarán dos torundas para cada fosa nasal.


 * __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Nasal __**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">.- Para la toma se introduce la torunda flexible unos 2 cms en la nariz, se gira suavemente contra la mucosa de la superficie nasal y se extrae. Basta con una sola torunda para cada fosa nasal.

<span style="font-family: 'Cambria','serif';"> __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**Esputo** __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">.- Es obtenido por el propio paciente teniendo en cuenta las siguientes consideraciones: <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> La muestra será de 2-10 ml siempre que sea posible.
 * __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">TRACTO RESPIRATORIO INFERIOR __**
 * Enjuagar la boca con agua destilada estéril o solución salina
 * Obtener el esputo tras una expectoración profunda, preferentemente matutina
 * En caso de no producirse una expectoración espontánea, puede inducirse el esputo realizando un drenaje postural, con fisioterapia respiratoria o con nebulizaciones de suero fisiológico estéril

__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**BRONQUIALES** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Se realiza la obtención con la ayuda de una broncoscopia. __<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">MATERIA FECAL ** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">En este caso la muestra la obtiene el propio paciente en las condiciones más estériles posibles y sin contaminación con la orina. Si las heces son formadas o pastosas se toma un porción del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfiere al recipiente estéril elegido para su envío al laboratorio. Se seleccionan las zonas donde haya sangre, moco o pus. El volumen mínimo en heces formadas o pastosas es de al menos 1-2 gr y en heces líquidas entre 5-10 ml. Las muestras deberán tomarse antes de la administración de antimicrobianos o antidiarreicos. En el caso de ser recogida por el personal sanitario se emplearía además del recipiente, mascarillas, gafas protectoras y guantes. Si el paciente lleva pañal, se debe invertir la cara del mismo de tal manera que la muestra quede recogida en la parte plástica.

__<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">GENITAL-URINARIO ** __ <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">La __orina__ es obtenida por el propio paciente. La muestra idónea es la primera micción de la mañana que permite la multiplicación de bacterias durante la noche. El volumen mínimo de la muestra es entre 5-10 ml. La técnica de recogida consiste en:
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Lavado de genitales externos con agua y jabón
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Aclarado con ag ua abundante
 * Se desechará la primera y última parte de la micción, recogiendo la parte media de la orina sin interrumpir el chorro en el recipiente estéril

Los pacientes incapaces de recoger la muestra por sí mismos, ésta se obtendrá tras realizar sondaje vesical.

Los exudados vaginales se obtienen colocando a la paciente en posición ginecológica, se introduce un espéculo y bajo visión directa se recoge la muestra con un torunda, de la zona con mayor exudado. La toma debe realizarse en una consulta que disponga de todo el material necesario. Es suficiente con una muestra.

Si existe exudado uretral, éste puede recogerse directamente con un asa de siembra y sembrar directamente en los medios de cultivo apropiados. El exudado puede estimularse exprimiendo la uretra. En caso de no obtener exudado, se introducirá una torunda suavemente unos 3 cms dentro de la uretra, realizando un movimiento de rotación. Después de realizada la toma sembrar inmediatamente. El número de muestras depende del número de microorganismos a investigar.

__**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">OCULARES **

En caso de investigación de //Chlamydia trachomatis// se debe everter el párpado y frotar con una torunda la superficie conjuntival. Se utilizará un torunda para cada ojo. __**Otras muestras**__ que recibe el laboratorio de Microbiología son: los raspados conjuntivales y corneales.
 * Frotis conjuntivales**__.- La muestra se obtendrá antes de instalar analgésicos locales, colirios o antibióticos. Con una torunda mojada en suero salino se frota sobre la conjuntiva inferior y especialmente sobre el ángulo interno.

__**ÓTICAS**__

Antes de tomar la muestra se limpiará con un antiséptico suave el oído externo. La muestra se tomará con torunda o por aspiración del fluido en el caso de abscesos. Se deberán obtener las secreciones de las zonas profundas. Se utilizará una torunda para cada oído. __<span style="font-family: 'Cambria','serif';"> __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Lo primero de todo se basa en la identificación del especimen. Es necesario determinar si se trata de un microorganismo aerobio o anaerobio para elegir el recipiente adecuado para su transporte.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">MICROBIOLÓGICO **

__<span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">MUESTRAS MICROBIOLÓGICAS __<span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">: requisitos: 1.- Toma de muestra: Evitar contaminación por otro microorganismo 2.- Etiquetado de la muestra 3.- Transporte (medios de transporte): medios en los que las bacterias no se pueden multiplicar. No hay nutrientes para ellas. Vitalidad pero no viabilidad hasta que sean cultivadas en el laboratorio de microbiología. 4.- Procesamiento en el laboratorio de microbiología: -Observación microscópica -Aislamiento, cultivo, contaje… -Técnicas de identificación y de sensibilidad a antimicrobianos

__<span style="font-size: 14pt; font-family: 'Cambria','serif';">MEDIOS DE TRANSPORTE __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">

Todas las muestras deberán ser enviadas lo más rápido posible a laboratorio. En todos los casos, el envío de la muestra debe evitar la salida del contenido por lo que el recipiente debe cerrarse con seguridad y siempre quedará claro la identidad de la muestra, la persona a quién pertenece, y los servicios solicitante y receptor. <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">__<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**Envase estéril de boca ancha:** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> .<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> <span style="font-family: 'Cambria','serif';">
 * Para: biopsias, tejidos, orinas, escamas, líquidos, esputos, secreciones bronquiales.
 * Estudia: micobacterias, aerobios, hongos, antígeno de Legionella y Neumococo
 * __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Port-A-Cul vial (medio de Cary Blair): __**
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: líquidos y exudados obtenidos por aspiración.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios, anaerobios, hongos y micobacterias.

<span style="font-family: 'Cambria','serif';">
 * __<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Port-A-Cul tubo (medio de Cary Blair): __**
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: raspados de heridas, escaras, abscesos, úlceras, pequeñas biopsias y tejidos.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios, anaerobios y hongos.

<span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> __<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Tubo estéril de tapón verde: ** __
 * __<span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Hisopo con medio de transporte Stuart: __**
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: abscesos y heridas recogidas con escobillón.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios y hongos.  <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';">
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">No válido para: anaerobios y micobacterias.
 * Para: líquidos estériles.
 * Estudia: micobacterias, aerobios y hongos.
 * No válido para: anaerobios, ni para líquidos con alto contenido hemático.

> <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">__<span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Tubo de plástico estéril: ** __ <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> __<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Hemocultivos adultos (Bactec): ** __ <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">
 * __Medio de transporte para virus:__**
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: aspirados nasofaríngeos, exudados y biopsias.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: virus.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: catéteres (no más de 4 cm), tejidos y líquidos.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios, hongos, micobacterias.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Precisa 3-4 ml por frasco.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: sangre y líquidos estériles.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios, anaerobios y hongos levaduriformes.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Precisa 10 ml por frasco.
 * __Hemocultivos pediátricos (Bactec):__**
 * Para: sangre y líquidos estériles.
 * Estudia: aerobios y hongos levaduriformes.

__<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Isolator (I. Adulto - 10, I. Pediátrico - 1.5): ** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">filamentosos.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: sangre.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: infecciones de catéter, micobacterias, brucelosis, legionella, bartonella y hongos

__<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Contenedor especial Para-Pak: ** __ <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"> __<span style="font-family: 'Cambria','serif';">**<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Medio de transporte para Chlamydias: ** __ > <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: 'Cambria','serif';"> <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"> Cuando las muestras van a tardar más de dos horas en ser procesadas, deben conservarse en las mejores condiciones posibles y esto va a depender del tipo de muestra.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: heces.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: aerobios y hongos.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Nota: Para el estudio de Clostridium difficile, Rotavirus y Cryptosporidium, RECIPIENTE ESTÉRIL DE BOCA ANCHA.
 * <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Para: muestras vaginales y balano-prepuciales.
 * <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Estudia: Chlamydias.
 * __<span style="font-size: 14pt; font-family: 'Cambria','serif';">Conservación de muestras: __ ||

· <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Muestras para virus: en NEVERA, salvo sangre, médula ósea, y Ag CMV. ·  <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Muestras para hongos: en NEVERA, salvo LCR, piel, pelo, uñas, vaginal y balano-prepucial. · <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Muestras para anaerobios: a Temperatura ambiente. ·  <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Muestras para micobacterias: en NEVERA, salvo contenido gástrico. · <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Muestras para __Bacteriología__: o <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">A temperatura ambiente: médula ósea, líquidos estériles (pleural, peritoneal, articular,...), muestras oculares, muestras de cavidad oral, heridas, abscesos, fístulas, adenopatías, del tracto genital, y biopsias. o <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">En NEVERA: orinas, heces, catéteres. o  <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">En ESTUFA: hemocultivos, LCR, placas y tubos inoculados. · <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Según el __microorganismo__ a investigar: o <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**ANAEROBIOS**: Máxima asepsia. ASPIRAR. Conservación a Tª ambiente. Enviar en PORT-A-CUL. o <span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**MICOBACTERIAS**: No recoger con escobillón. Conservar en nevera. Enviar en envases estériles de boca ancha. Rapidez en envío. o <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**HONGOS**: ASPIRAR Y RASPAR. Conservar en nevera (excepto tracto genital, uñas, pelo,...). Rapidez en envío. o <span style="font-family: 'Cambria','serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">**VIRUS**: Tomar muestras en estadio precoz. Transporte específico. Conserva   <span style="font-family: 'Abadi MT Condensed','sans-serif';"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">ción en nevera.

Medios de cultivo específicos y condiciones de cultivo bacteriano. Exámen microscópico. **<span style="color: rgb(255,3,0);">(Ángel Pérez Álvarez) **
Los medios de cultivo son soportes con sustancias alimenticias que permiten el crecimiento del microorganismo, y muestran una morfología de las colonias típica. Se usan para aislar e identificar microorganismos, conocer su metabolismo , hacer antibiogramas y pruebas de concentración inhibitoria mínima , así como cuantificar el número de UFC/ml. Los medios deben tener determinadas condiciones para que los gérmenes puedan crecer apropiadamente, son : pH , temperatura , humedad , presión de oxígeno , así como nutrientes y factores de crecimiento. Algunas bacterias requieren condiciones similares al medio interno humano, por eso se deben aportar extractos de carne. Si se quiere solidificar el medio se puede usar agar, es el más utilizado , y no interfiere con el crecimiento bacteriano. La gelatina se usa poco, dado que es licuada por muchas bacterias. Se pueden añadir colorantes que actúan como indicadores de pH ( por ejemplo, el rojo fenol es amarillo a pH ácido y rojo a pH básico ).


 * Nutrientes que aportan energía :**

Carbono : proviene de carbohidratos, hidrocarburos o gas carbónico. Nitrógeno : proviene de las proteínas o de sus precursores ( péptidos, aminoácidos )


 * Otros requerimientos no energéticos :**

Azufre : proviene de los sulfatos Fósforo : proviene de los fosfatos Sales inorgánicas Iones metálicos : Cu, Co , Mn , Zn , Mo Factores de crecimiento : aminoácidos , bases nitrogenadas, vitaminas Factores de arranque : glucosa, iones. Para dar comienzo al crecimiento bacteriano Factores inhibidores : impiden el crecimiento : antibióticos, azida sódica para gram - , eosina azul de metileno o violeta de genciana para gram +


 * Temperatura :**

Los microorganismos mesófilos crecen en un rango de temperaturas que va de 15ºC a 43ºC. Los psicrófilos pueden crecer a 0ºC, mientras que los termófilos a 80ºC o más ( hipertermófilos ) , sin embargo los patógenos humanos crecen en torno a 37ºC , en unos intervalos de temperatura mucho más estrechos.


 * Humedad :**

Se necesita cierta humedad tanto en el medio como en su atmósfera, para ello se precisa una fuente de agua que la mantenga y no se deseque el medio.


 * pH :**

Se usan buffers para estabilizar el pH. Hay microorganismos que crecen mejor a pH ácido o básico, aunque la mayoría se desarrolla mejor a pH neutro.


 * Presión osmótica :**

Deben ser 300 miliosmoles, aunque hay bacterias que requieren altas concentraciones de NaCl.


 * Presencia o no de oxígeno u otros gases :**

La mayoría de bacterias crecen con concentraciones de oxígeno normales, pero los anaerobios estrictos requieren ausencia de oxígeno , y los microaerófilos condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias. Los anaerobios facultativos se pueden adaptar a cualquier situación.


 * Luz ambiental :**

La mayoría de microorganismos crecen mejor en la oscuridad.


 * Esterilidad del medio :**

El autoclave esteriliza los medios para evitar la aparición de microorganismos que interfieren con el crecimiento normal de los especimenes sembrados.


 * Consistencia del medio :**

Un medio líquido se puede solidificar con albúmina, gelatina o agar hasta conseguir medios sólidos o semisólidos. La mayoría de medios que se usan en los laboratorios son sólidos, pero también están extendidos los líquidos.


 * __Clasificación de los medios de cultivo :__**


 * __Según su estado físico :__

Sólido :** Las bacterias tienen más problemas para crecer, ya que desaparecen con rapidez los nutrientes , pero permite aislar , purificar y observar colonias , así como hacer antibiogramas. acceso a ellos. Se usa para múltiples pruebas.
 * Semisólido :** Tiene menor concentración de agar que el sólido, se usa para estudiar propiedades bioquímicas de los microorganismos.
 * Líquido :** (caldos), no tiene solidificante . Los nutrientes están más dispersos , y los microorganismos crecen más facilmente al tener mejor


 * __Según su composición :__**


 * Naturales :** Tienen sustancias que se encuentran en la natualeza
 * Semisintéticos :** Tienen sustancias naturales hidrolizadas
 * Sintéticos :** Tienen fuente de carbono, nitrógeno , minerales y factores de crecimiento
 * Complejos :** Sirven para estudiar virus o parásitos


 * __Según su uso :__**

( tiene sustancias que frenan el desarrollo de ciertos microorganismos, sirve para evitar la contaminación o aislar ciertas especies ) , o **__diferenciales__** ( tiene indicador que permite aislar determinadas especies )
 * Para aislamiento :** Para obtener colonias aisladas . Pueden ser medios __**enriquecidos**__ ( para microorganismos exigentes ), **__selectivos__**
 * Para crecimiento general :** (comunes), para cultivar la mayoría de microorganismos
 * De identificación :** Sirven para clasificar el microorganismo
 * De mantenimiento de cepas :** Sirven para mantener cepas vivas durante largo tiempo


 * __Según su presentación :__

Deshidratados/liofilizados :** En el laboratorio se debe añadir el agua microorganismos aerobios, si se siembra por picadura estudia los microorganismos anaerobios.
 * Ya preparados**
 * Sólidos en placa Petri :** Ocupan superficie amplia, facilita la identificación de colonias.
 * Sólidos en tubo :** El agar está inclinado y es sólido, para aumentar la superficie de siembra . Si se siembra por estrías estudia los
 * Líquidos en tubo :** Para hacer pruebas bioquímicas
 * Semisólidos en tubo :** Para hacer pruebas bioquímicas, se siembra mediante picadura
 * De doble fase en frasco o tubo :** Tiene una fase sólida y otra líquida


 * Algunos de los medios de cultivo son los** **siguientes:**
 * __Medio con ácido cafeico__ : para //Cryptococcus neoformans//, se observan las colonias de color negro.
 * __Medio de transporte de Amies__ : para la mayor parte de bacterias de la boca.
 * __Agar para auxonograma__ : de selección mediante discos. Estudios de asimilación de hidratos de carbono o nitrato por levaduras.
 * __Agar bilis esculina para bacteroides__.
 * __Agar bilis esculina para //Streptococcos//__.
 * __Agar //Brucella//__.
 * __Caldo con carne__ : para microorganismos anaerobios de crecimiento lento y difícil.
 * __Caldo cerebro-corazón__ : BHI (Brain Heart Infusion) para microorganismos exigentes.
 * __Agar con cetrimida__ : para gram negativas no fermentadoras de glucosa o //Pseudomonas aeruginosa//.
 * __Agar chocolate__ : contiene hematíes lisados a 50 ºC, por ejemplo para //Haemophilus influenzae//.
 * __Agar mycosel__ : nuevo agar de Sabouraud con glucosa que contiene cicloheximida y cloranfenicol. Se utiliza para detectar dermatofitos.
 * __Agar clindamicina__ : para //Eikenella//.
 * __Medio EMJH__ : para //Leptospira//.
 * __Medio de Lowenstein-Jensen__ : asparragina, glicerol, huevo, patata y verde malaquita. Es un medio sólido y en lengüeta, de color verde, utilizado para el crecimiento de micobacterias.
 * __Agar Mac-Conkey__ : para //Escherichia coli//.
 * __Agar manitol salado (Medio de Chapman)__ : para //Staphylococcus//.
 * __Medio para prueba de oxidación-fermentación__ : estudio de metabolismo de carbohidratos. Utiliza como indicador el rojo de fenol.
 * __Agar Sabouraud__ : recuperación de hongos a partir de muestras clínicas.
 * __Agar Thayer-Martin__ : para //Neisseria//.


 * __Observación al microscopio :__**

Las tinciones sirven para aumentar el contraste entre la bacteria y el medio, distingir diferentes tipos celulares , o revelar la presencia de ciertos componentes celulares ( flagelos ,esporas , cápsulas , paredes celulares ). Las bacterias deben fijarse antes de ser teñidas, mediante calor o sustancias químicas ( formaldehído , ácidos , alcoholes ). Luego se añade el colorante. La mayoría de colorantes tienen afinidad por elementos celulares concretos : Los cationes se unirán a ácidos nucleicos y polisacáridos ácidos ( azul de metileno, cristal violeta , safranina ). Los aniones se unirán a proteínas ( eosina, fucsina ácida , rojo Congo ). Otros son liposolubles, se unen a elementos lipídicos ( negro Sudán ). La tinción negativa deja las células sin teñir, colorea el medio , luego lo que se observa es el perfil de las células. Se usa tinta china o nigrosina, que no tienen afinidad por los componentes celulares , simplemente rodean las células. Es útil para revelar la presencia de cápsula bacteriana, y también para visualizar Treponema.


 * Tipos de tinción :**

bacterias. azul de lactofenol ) fijan de acuerdo con su propia estructura química ( Gram, Ziehl-Neelsen )
 * Sin tinción :** No se usa ningún colorante, es el montaje directo húmedo o examen en fresco . Se puede observar el tipo de movilidad de las
 * Tinción simple :** Se usa un solo colorante, todas las estructuras celulares se tiñen con la misma intensidad ( tinta china , azul de metileno o
 * Tinción diferencial :** Se usan varios colorantes combinados, las estructuras celulares se diferencian en función de los diferentes colorantes que


 * Tinciones más utilizadas:**
 * __Tinción de Gram__ : cristal violeta, lugol, alcohol y safranina. Gram + = violeta. Gram - = rojo.
 * __Tinción de Ziehl-Neelsen:__ micobacterias, Cryptosporidium.
 * __Tinción de ácido-alcohol resistencia__.
 * __Azul de metileno__ : Cloruro de metiltininio.
 * __Bailenger__ : quistes y trofozoitos.
 * __Tinción capsular__.
 * __Tinción flagelar__.
 * __Giemsa__.
 * __Rodamina-auramina:__ para microorganismos ácido-alcohol resistentes.
 * __Naranja de acridina:__ sirve como colorante vital, tiñe de color verde los microorganismos vivos , y de rojo los muertos.
 * __Blanco de calcofluor:__ para hongos.

__Tinción de Gram :__

El frotis fijado con calor se tiñe 1 minuto con cristal violeta, y se tira el exceso de colorante. Se cubre con solución yodada (lugol) durante 1 minuto y se tira el exceso. Se decolora con una mezcla de alcohol etílico y acetona durante 20 segundos, y se lava con agua. Se cubre con safranina durante 1 minuto, se lava y se seca. Tras aplicar el cristal violeta, todas las células son azules. Tras aplicar el alcohol/acetona, los gram+ no se decoloran , pero sí los gram- , que quedan incoloros. Para poner de manifiesto los gram- se usa la safranina, que les da color rojo , mentras que los gram+ quedan igual. Por tanto, tras la tinción de Gram , las bacterias gram+ tendrán color azul , y las gram- rojo.

Enlace externo: [|Página web con diferentes medios de cultivo (gran variedad).]

**__PRUEBAS DE INMUNODIAGNÓSTICO__** ** (César Fernández García) **


 * DEFINICIÓN:** Conjunto de pruebas inmunoquímicas basadas en la reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) aplicadas al estudio de procesos infecciosos. Son pruebas que evalúan la respuesta inmune (humoral o celular) del hospedador contra el parásito con el fin de determinar una infección aguda o una respuesta inmunológica a una infección pasada. De forma general, se puede hablar de inmunodiagnóstico para referirse a todos los procedimientos para el diagnostico de enfermedades infecciosas basadas en la reacción Ag-Ac.

**CRACTERÍSTCAS** : Las técnicas de inmunodiagnóstico tienen tres características esenciales: - **Sensibilidad:** Capacidad de la prueba para detectar la enfermedad. - **Especificidad:** Es la capacidad de la prueba para clasificar a los individuos sanos como tales. - **Valor predictivo:** Puede ser positivo o negativo. El VPP (valor predictivo positivo) indica la capacidad de la prueba para confirmar la presencia de una enfermedad (probabilidad de padecer la enfermedad si la prueba a resultado positiva); mientras que el VPN seria la capacidad para descartarla (probabilidad de estar sano si la prueba es negativa). En resumen tanto la sensibilidad como la especificidad proporcionan información sobre la probabilidad de obtener un resultado correcto, en otras palabras indica la validez de la prueba, mientras que los valores predictivos indican la seguridad diagnóstica de la prueba.

**-Unión del Ag al Ac** : Unión del determinante antigénico al sitio activo con la formación del complejo Ag-Ac. **-Manifestaciones a consecuencia de la unión:** Dependiendo de diversos factores (naturaleza del Ag, condiciones de la reacción,…) se pueden diferenciar varios tipos de reacciones Ag-Ac. ** Tipos de reacciones: ** - **Precipitación:** Unión de un antígeno a un anticuerpo formando un complejo Ag-Ac soluble que forma precipitados visibles. Esta reacción necesita concentraciones adecuadas tanto de Ag como de Ac. **- Neutralización:** Se produce neutralización de toxinas, virus o enzimas a partir de anticuerpos específicos. **-Aglutinación:** Formación de agregados visibles a simple vista. **-Inmunofluorescencia:** Se usa un anticuerpo marcado con compuestos fluorescentes (aunque el anticuerpo este unido a este compuesto, su especificidad por el antígeno no se ve alterada). Existen dos técnicas de inmunofluorescencia: directa e indirecta. ·Directa: Se marcan los anticuerpos específicos para un antígeno determinado. ·Indirecta: El anticuerpo marcado se dirige al anticuerpo específico de un antígeno situado ya en la superficie de la célula. **MÉTODOS DE INMUNODIAGNÓSTICO:** El diagnóstico de enfermedades infecciosas puede ser de dos tipos: **-Métodos directos** : el objeto de búsqueda es el propio microorganismo o alguno de sus componentes. **-Métodos indirectos** o **serológicos** : son aquellos en los que se va a buscar la respuesta del sistema inmune del hospedador frente al agente infeccioso. ** MÉTODOS DIRECTOS: ** **-Inmunofluorescencia directa (IFD):** Las muestras se colocarán sobre portaobjetos donde se dejan secar y fijar. Luego se agregan anticuerpos específicos marcados con isotiocianato de fluoresceína que se combinan con los antígenos. La reacción ag-ac se puede visualizar en el microscopio de fluorescencia. **-Test de aglutinación en látex:** Las partículas de látex son esferas de poliestireno que se unen fácilmente al Fc de las IgG y las IgM. Los fragmentos de unión del anticuerpo (FAb) quedan expuestos y son capaces de unirse al antígeno que se encuentra en la muestra. Cuando los antígenos tienen varios epítopes (o estructuras antigénicas repetitivas), los anticuerpos multivalentes acoplados a múltiples partículas de látex se unen al antígeno y se produce un entramado de las partículas de látex que dan como resultado una aglutinación visible. **-Inmunoensayo:** Son inmunoensayos en fase sólida donde se fijan los anticuerpos específicos para el antígeno en la superficie de una matriz, tubo o microplaca y luego se pone en presencia del suero o muestra que contiene el antígeno que se quiere demostrar; una vez ocurre la reacción antígeno-anticuerpo, se hace un lavado y se agrega un anticuerpo marcado. Estas pruebas pueden ser radioinmunoensayo (RIA) o inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA o EIA) dependiendo del trazador que se utilice para evidenciar la reacción. Se denomina **RIA** cuando el anticuerpo se marca con un isótopo radioactivo. El anticuerpo que reacciona a manera de sándwich, se pega a los epítopes del antígeno que han quedado expuestos; después de varios lavados, se mide o cuantifica la radioactividad mediante un contador de centelleo. El número de destellos por minuto es directamente proporcional a la concentración del antígeno que reacciona. En la técnica **ELISA** el anticuerpo se marca con una enzima y para revelar la reacción se coloca el sustrato específico para la enzima que es modificado por ésta y produce un compuesto coloreado. Para la cuantificación se mide la absorbancia en una longitud de onda determinada en un espectrofotómetro. La absorbancia será directamente proporcional a la cantidad de antígeno descubierto. ** MÉTODOS INDIRECTOS: ** **-Fijación del Complemento (FC):** En un principio el ag reacciona con el ac que se encuentra en la muestra de suero del paciente y en presencia de complemento, titulado previamente. Si el antígeno y el anticuerpo reaccionan se activa la vía clásica del complemento. Seguidamente se añade el indicador constituido por eritrocitos cubiertos con anticuerpos y de esta forma, si el complemento se fija y es activado por el complejo ag-ac, los eritrocitos no se lisan; pero si no hay unión ag-ac, el complemento permanece libre y se une al complejo indicador y produce lisis de los eritrocitos. En conclusión este método emplea el complemento para lisar eritrocitos que a su vez funcionan como indicadores. La interpretación de la prueba de fijación de complemento es que la lisis es resultado negativo de la prueba y la ausencia de lisis un resultado positivo. **- Hemoaglutinación indirecta:** Para realizar esta prueba se utilizan antígenos ligados a eritrocitos, para detectar anticuerpos específicos. Los eritrocitos se pueden sensibilizar con diversos antígenos y se pueden utilizar como sistema indicador. **- Aglutinación de látex:** Similar a la técnica de látex ya descrita sólo que en este caso el antígeno se encuentra fijo a la partícula de látex y, por tanto, se espera descubrir los anticuerpos que se encuentran en la muestra. **- Inhibición de la Hemoaglutinación (IH):** Esta prueba demuestra la capacidad de algunos antígenos para aglutinar eritrocitos. Esto lo hacen debido a que sus proteínas, interactúan con receptores sobre la superficie del eritrocito, sin embargo la interacción es impedida por anticuerpos específicos en el suero del paciente evitando la aglutinación de los eritrocitos por tales antígenos. La interpretación de la prueba de IH se lee de la siguiente manera: aglutinación positiva (se forma un recubrimiento rojo granular difuso en el fondo del tubo) o aglutinación negativa (botón rojo compacto en el fondo del tubo que se desliza al inclinarlo). - **Inmunofluorescencia Indirecta (IFI):** Es un método rápido y confiable que permite la detección de anticuerpos en el suero de paciente. Se basa en la unión de anticuerpos presentes en el suero del paciente a los antígenos expresados en la superficie de células infectadas. **-Inmunoensayo Ligado a Enzimas (ELISA):** La prueba ELISA indirecta tiene un principio semejante al de la ELISA directa, sólo que en este caso, un antígeno específico está unido a una fase sólida que puede ser un tubo, microplaca o perlas de vidrio; luego se añade el suero del paciente que posee los anticuerpos y después se adiciona el conjugado constituido por un anti-anticuerpo IgG o IgM unido a una enzima; posteriormente se adiciona el sustrato específico para la enzima, que lo va a modificar y produce un compuesto coloreado, cuya intensidad es proporcional a la concentración de anticuerpo en el suero del paciente.
 * COMPLEJO Ag – Ac** :
 * Reacción antígeno – anticuerpo:** Las reacciones Ag-Ac se pueden dividir en dos grandes fases.


 * __DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO EN MICOLOGÍA Y VIROLOGÍA ORAL.__ (Humera Safir) **

__Diagnóstico de las enfermedades víricas__

En el laboratorio, la infección vírica se puede demostrar por métodos directos o indirectos.

1) __Diagnóstico directo:__

Su objetivo es: Detección de elelmentos virales directamente sobre la muestra. La recogida de muestra ha de hacerse preferentemente en fase aguda( en los primero 5-7 días del comienzo de la infección virica).En fase tardía o convaleciente,las posibilidades de recuperación del virus es improbable.Las muestras con celularidad son las idoneas para recuperar virus.El frotis para la obtención del exudado, debe hacerse frotando ligeramente para desprender células que son las que contienen la mayor cantidad de virus.Debe utililizarse medios de transporte que contengan soluciones tamponadas, antibióticos, nutrientes adecuados, etc. Si el procesamiento se va a retrasar, se conservarán 4 °C durante 48 horas o a -70°C si la demora es larga. Deberá seguirse la siguiente metodología:

• Microscopía electrónica: esta técnica permite la observación directa de los virus. Tiene los inconvenientes el primero es que necesita un número mínimo de partículas (106 partículas/ml) y no permite distinguir entre virus con morfología semejante. Este problema se puede eliminar acoplando anticuerpos específicos.

• Microscopía óptica: usando tinciones histológicas se pueden observar las alteraciones celulares.

• Detección de antígenos víricos: los antígenos presentes en una muestra se pueden demostrar por técnicas inmunológicas, que utilizan anticuerpos marcados con fluorocromo (inmunofluorescencia), enzimas (enzimoinmunoanálisis) o isótopos radiactivos (radioinmunoanálisis).

• Detección de genomas víricos: para detectar el genoma de los virus, cuando el número de copias que suficientemente elevado, se puede emplear la hibridación de ácido nucleico sobre el tejido infectado; en caso contrario se requiere primero aumentar el número de copias mediante PCR y, posteriormente, proceder a la hibridación de la muestra amplificada. La detección de ácido nucleico no siempre se asocia a enfermedad, excepto cuando se detecta en el sistema nervioso central, ya que puede persistir un resultado positivo tras la inspección superada. No obstante, la ausencia excluye enfermedad. Puede detectarse también ARNm usando técnicas complejas; su presencia se asocia a replicación vírica y, probablemente, a enfermedad actual. Sin embargo, su ausencia no excluye esta última.

2) Diagnóstico indirecto: Objetivo: Cultivo de la muestra sobre un sistema celular.

Cultivo y detección de los virus: se utilizan los cultivos celulares en forma de mono capas y hoy en día son los más empleados. Existen distintos tipos:

➢ Con células de primer explante o cultivo primario. Se obtienen a partir de tejidos animales o humanos. Tienen un número par de cromosomas y una capacidad de reproducción muy limitada: dos o tres pases o generaciones. Así, pueden usarse células amnióticas o de riñón embrionario humano, de riñón de mono, etc. ➢ Con células diploides. También son células normales; conserva un número par de cromosomas, pero pueden reproducirse hasta 40 ó 60 generaciones. En ese caso, por ejemplo, de los fibroblastos humanos WI-38. ➢ Líneas celulares continúas. Son capaces de reproducirse in vitro de manera indefinida. Suelen proceder de tejidos neoplásicos o de células normales mutadas. Presentan, obviamente, alteraciones en el número y la morfología de los cromosomas.

La presencia vírica se puede detectar mediante diferentes procedimientos:

• Efectos citopático o alteraciones que producen en las células. • Neutralización del efecto citopatógeno con sueros de referencia frente al virus que se sospecha. • Hemadsorción y hemaglutinación. • Neutralización de la hemadsorción y hemaglutinación con sueros de referencia. • Interferencia. Existen virus que no ejercen y efecto citopático, pero su presencia en el interior de las células interfiere el de otro que sí lo produce. • Detección de componentes víricos por diversas técnicas inmunológicas usando anticuerpos. • Detección de ácidos nucleicos por técnicas de biología molecular.

El __**Shell-vial**__ es una técnica de diagnóstico rápido para algunos virus; combina por una parte el cultivo celular y, por otra, la detección de antígenos víricos por inmunofluorescencia. En este caso, la mono capa celular se dispone en portaobjetos circulares incluidos en fondos de viales que contienen medio de cultivo. Tras dispensar la muestra se realiza una centrifugación del vial para favorecer la inoculación de la monocapa. Tras la incubación (18-48 horas) se realizará una inmunofluorescencia directa sobre el portaobjetos usando anticuerpos monoclonales.

Otras formas de diagnostico indirecto son:Investigación sobre los anticuerpos de clase IgG, IgA e IgM mediante látex, inmunofluorescencia, enzimoinmunoanálisis, fijación del complemento, etc. Como antígenos pueden utilizarse cultivo celular infectado con el virus, péptidos sintéticos o recombinantes o antígeno solubles. La IgM aparece a los 10 días tras los síntomas y persiste 2 a 3 meses. La IgA lo hace algo más tarde, está presente en un título bajó y las pruebas comerciales a veces no tienen una sensibilidad adecuada para detectarla. La IgG aparece a los 15 días y persiste en escasa cantidad durante años. Suele haber para muchos virus una gran prevalencia de estos anticuerpos en la población. El diagnóstico de laboratorio tiene características especiales, entre ellas que son necesarios medios de cultivo vivos para la recuperación de los agentes. La prevención de las enfermedades infecciosas víricas se basa en medidas generales de higiene, gammaglobulinas específicas y vacunas. Actualmente se dispone de gran número de antivíricos para el control de estas infecciones, un mecanismo de acción basado en el bloqueo directo de una función o el mimetismo molecular.

__**Diagnóstico de las micosis por el laboratorio**__

El diagnóstico de laboratorio de las micosis se establece mediante el cultivo de la muestra clínica y por una serie de métodos independientes del cultivo.

a) __**Cultivo**__ Suele ser el método más empleado y, con la excepción del hemocultivo que se realiza en medio especial, el producto patológico en el que se sospecha la existencia de un hongo suele sembrarse en agar glucosado de Sabouraud. Este medio puede hacerse más selectivo añadiendo antibióticos como el Cloranfenicol. De esta forma, las bacterias que pueden estar presentes en algunas muestras cutáneas o de mucosas no interferirán en el crecimiento fúngico. Tras el cultivo, la identificación es diferente en los hongos filamentosos y en los levaduriformes. Los primeros se identifican por las características de las colonias, sobre todo el color, textura y velocidad de crecimiento, así como por el aspecto de las esporas y conidios que puedan formarse. La identificación de los hongos levaduriformes se basa en el estudio microscópico de las cepas para observar algunas características diferenciales y en la realización de pruebas y fermentación y asimilación de diversos azúcares. Para ello se suelen emplear sistemas comercializados que permiten acceder a la identidad del microorganismo sin códigos numéricos en función de datos previos de las diferentes levaduras. El estudio de estos hongos y, de forma especial, que los de mayor de relevancia clínica se ha visto facilitada enormemente con la introducción de medios cromógenos que permitan el aislamiento y la identificación simultánea, al generarse colonias con colores diferentes para las distintas especies.

b) __**Métodos independientes del cultivo**__

• Observación directa de la muestra clínica, bien por examen microscópico en fresco o bien utilizando tinciones que permitan observar más fácilmente los hongos presentes en el producto patológico. • La detección de componentes fúngicos no antígenos, como los ácidos nucleicos o el β(1-3) glucano. • La serología, detectando diversos antígenos fúngicos y la respuesta de anticuerpos que se produce en el paciente. • Intradermoreacciones • Inoculación experimental

Secuencialmente tras la toma de la muestra, que variará en función del proceso patológico y su envío al laboratorio en condiciones adecuadas, se procederá al examen microscópico para la observación directa. Si es posible, se realizará una investigación de componentes fúngicos no antígenos. Casi siempre el método de referencia será el cultivo. Sólo en casos excepcionales se recurrirá al estudio de la respuesta del hospedador por serología o intradermorreacciones. Más raramente aún será necesaria una inoculación experimental.

En definitiva, el diagnóstico de las micosis comprende métodos directos (detección del hongo y sus componentes) e indirectos (estudio de la respuesta del hospedador).