Tema 6. Cocos Gram positivos II y cocos Gram negativos.

G. Streptococcus: Caracteres morfológicos, antigénicos y hemolíticos. Criterios de clasificación. Diagnóstico microbiológico. (Juan Alvarez López).
Grupo de S. mutans: Metabolismo de la sacarosa. Acción patógena. Factores de virulencia. Antigenicidad.
Otros grupos orales: S. salivarius, S. milleri y S. oralis.
Cocos Gram negativos orales: G. Veillonella. (Ana González Sanz)




G. Streptococcus: Caracteres morfológicos, antigénicos y hemolíticos. Criterios de clasificación. Diagnóstico microbiológico. (Juan Alvarez López).

Cocos Gram. + agrupados en cadenas que puede ser diplococos o cadenas muy largas porque se replican en 1 solo plano.
Anaerobios aerotolerantes catalasa – (a diferencia de Staphylococcus).
Algunos son patógenos estrictos de origen ambiental y otros forman parte de la microbiota intestinal y del tracto respiratorio superior.
No tienen cápsula excepto aquellos que viven en la faringe.
El medio de cultivo idóneo es agar–sangre enriquecido con aminoácidos.
Hay varias especies que se clasifican según 3 criterios:

1) Hemólisis:

i. α-hemolíticos: la hemólisis es parcial porque sólo utilizan Fe consiguiendo un color verdoso debido a la oxidación de hemoglobina en biliverdina.
ii. β-hemolíticos: hemólisis completa (Fe + aminoácidos) que deja un halo transparente alrededor de las colonias. Casi todas las especies patógenas son β-hemolíticas y casi todas las β-hemolíticas son patógenas.
iii. γ-hemolíticos: no hay hemólisis.

2) Estructura Ag.:

Son antígenos localizados en la pared celular y en la cápsula, con 3 variedades:
i. Ag. de grupo: situados encima de los péptidoglucanos, son polisacáridos o ac. teicoicos que permiten dividir a los Streptococus en los grupos de Larcefield, muy útiles en diagnóstico (destacan A, B y D). Algunas especies como el Neumococo no tienen este Ag.
ii. Ag. de tipo: situados encima, son proteínas muy relacionadas con la virulencia.
iii. Ag. capsulares: por encima, son polisacáridos o dextranos (polímeros de ac. hialurónico).

3) Pruebas fisiológicas:

Hemólisis en agar–sangre:

i. α:

Solubles en bilis.
Sensibles a optoquina:
+ : S. pneumoniae o Neumococo.
– : S. viridans.

ii. β:

Según sensibilidad a bacitracina:
+ : GRUPO A à S. pyogenes.
– : NO GRUPO A.

iii. γ:

Tolerantes a altas concentraciones de sal.
Según su crecimiento en biliesculina:
+ : Enterococos.
– : No Enterococos.


Streptococcus pyogenes:

Estreptococo β-hemolítico del grupo A y encapsulado.
Forma parte de la microbiota de la rinofaringe en el 5 – 10% de la personas.

Factores de virulencia:
Ag. superficiales: Proteína M y cápsula, propiedades antifagocitarias.
Enzimas:
Estreptoquinasa: fibrinolisis.
EstreptoDNAasa: no es una verdadera DNAasa porque desdobla el ADN.
Hialuronidasas y proteasas (necrosis tisular).
Toxinas:
Toxina eritrogénica o exotoxina pirógena: sus genes están codificados en fagos y son responsables del exantema de la escarlatina.
Estreptolisina O: responsable de la hemólisis en profundidad, tiene gran afinidad por el colesterol degradando las membranas plasmáticas de hematíes y leucocitos. Es antigénica y sensible al O2.
Estreptolisina S: responsable de la hemólisis en superficie, tiene gran afinidad por los fosfolípidos y no es antigénica.

Cuadros clínicos:
Faringoamigdalitis: es contagiosa y frecuente en niños, caracterizada por fiebre, dolor de garganta, exudado con bacterias y PMN (si tiene origen vírico aparecen más mononucleares).
Escarlatina: afecta a niños cuando las cepas de S. pyogenes son lisogenizadas por un fago productor de toxina eritrogénica, causando exantema generalizado.
Fiebre reumática: aparece en faringoamigdalitis o escarlatina mal curadas.

Diagnóstico:
Debe ser bacteriológico.
Exudados rinofaríngeos que se siembran en agar–sangre para observar colonias β-hemolíticas.
Catalasa – a diferencia de Staphylococcus.
Resistencia a optoquina y β-hemolisis a diferencia del Neumococo.
Sin embargo puede utilizarse un diagnóstico indirecto buscando antiestreptolisina O en el suero del enfermo, en ese caso se incuba en una placa y se inhibe la hemolisis.

Tratamiento:
Los antibióticos de elección son cefalosporinas y macrólidos.
Antes se utilizaba estreptomicina, pero se prohibió por sus efectos tóxicos.
A veces se usa augmentine (amoxicilina + ácido clavulánico).


Streptococcus pneumoniae o Neumococo:

Diplococos α-hemolíticos más alargados que otros cocos.
Cápsula voluminosa pero carecen de Ag. de grupo.
Colonias como gotas de rocío que se lisan fácilmente.
50% de personas portadoras.

Factores de virulencia:
Cápsula: propiedades antifagocitarias.
Neumolisina: hemolisina antigénica muy similar a estreptolisina O.
Neuoaminidasa: enzima exocelular que hidroliza el ácido neuroamínico de los glucolípidos y glucoproteínas de la membrana plasmática.
PSP: responsable de la adherencia y se cree que también tiene funciones citotóxicas.

Cuadros clínicos:
Neumonía clásica: es de tipo lobular y puede afectar a personas sanas (contagiadas por un portador). Sin embargo, son más frecuentes las autoinfecciones endógenas en situaciones de inmunodepresión, ya que la persona aspira los Neumococos y se instalan en sus alvéolos pulmonares. La sintomatología se caracteriza por fiebre y esputo purulento.
Meningitis: afecta a niños y adultos, es la 3ª causa de meningitis. Meningococo > Haemophylus > Neumococo.
Artritis y endocarditis.

Diagnóstico:
Bacteriológico con varias opciones:
Siembra de esputos (neumonía) o LCR (meningitis) en agar–sangre con antibióticos inhibidores de la microbiota y con optoquina, obteniendo a su alrededor un halo de inhibición.
Mezcla de una suspensión de colonias con sales biliares produciendo su lisis.
Demostración de Ag. capsulares por aglutinación de látex y contrainmunoelectroforesis.

Tratamiento:
El Neumococo suele ser resistente a las penicilinas, se utilizan cefalosporinas o macrólidos.

Streptococcus agalactiae:
Son β-hemolíticos del grupo B.
A veces (10%) forman parte de la microbiota de vagina e intestino.
Producen meningitis neonatales y septicemias a partir de madres portadoras.
Los antibióticos de elección son β-lactánicos y aminociclitoles.

Enterococcus faecalis / faecium:
Streptococcus γ-hemolíticos del grupo D que forman parte de la microbiota intestinal.
Producen infecciones nosocomiales (infecciones urinarias, bacteriemias, endocarditis….).
Resistente a β-lactámicos. Antibiograma: macrólidos y teicoplanina.

Streptococcus viridans:
Familia α-hemolíticos (resistentes a optoquina) y sin cápsula.
La especie más importante es Streptococcus mutans, productor de la caries porque degrada azúcares en a. láctico y esta acidificación destruye el esmalte.
Muy sensibles a penicilinas y macrólidos.




COCOS GRAM – (Ana González Sanz)
Las Bacterias Gram negativas se caracterizan por presentar una membrana celular interna la cual se rodea por una pared celular delgada de peptidoglicano y, hacia el lado externo del cuerpo de la célula una membrana celular externa que recubre la pared celular en estas bacterias. Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa está el espacio periplásmico el cual presenta una sustancia llamada periplasma la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias. La membrana externa presenta una estructura llamada lipopolisacárido (LPS) y tiene diversas proteínas, siendo una de ellas las proteínas llamadas porinas o canales proteícos. El LPS está formado por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).
Los unicos coco gram- de la cavidad oral son los cocos veillonella: v.parvula, v. atypica, v. dispar.


Hay otras especies de gram – pero que estan en la cavidad oral de animales.



Caracteristicas generales:

Se agrupan en cadenas cortas o en parejas.
No metabolizan los hidratos de carbono
Mediante la fermentacion del ac lactico produce energia., ac acetico, CO2, y ac propionico
Se encuentra en la placa dental, en el dorso de la lengua, saliva y intestino.
Tiene actividad proteolitica, es decir, produce ciertas enzimas que degradan proteinas . se liberan compuestos volatiles, que dan lugar a la halitosis.



Veillonella ** (Ana González Sanz)
La veillonella la identificó Zuber Veillón y dadas sus características distintas al estreptococus mutans fué seleccionada como el primer microrganismo a enfrentarla con él en las investigaciones que se realizarían.
Las veillonellas son cocos gram-negativos anaerobios asociados con salud oral. Para su aislamiento, se han reportado diferentes medios de cultivo. Las colonias de Veillonella spp. producen fluorescencia roja visible con luz ultravioleta, que desaparece en contacto con oxígeno.
Esta propiedad sería útil para su identificación presuntiva rápida. Los objetivos de este trabajo fueron:
1- comparar el medio selectivo para Veillonella de Rogosa con los medios de cultivo recomendados por diferentes autores para determinar en cual de ellos se obtiene una mejor recuperación de veillonellas a partir de saliva, ya que esta muestra es generalmente utilizada para determinar la presencia y predominio de esta bacteria.
2- detectar la producción de fluorescencia en estos medios de cultivo como método rápido de identificación. Los medios de cultivo estudiados fueron: medio selectivo para Veillonella, agar Schaedler para anaerobios con vitamina K, agar tioglicolato, agar infusión cerebro corazón, agar Brucella, agar tripteína soja y agar Columbia con y sin el agregado de vancomicina y sangre lacada. La muestra ensayada fue un pool de saliva. Se hicieron recuentos de colonias de veillonellas y de microorganismos totales expresados en UFC/ml de saliva. La mayor recuperación de veillonellas en saliva se obtuvo en el medio selectivo para Veillonella con vancomicina y sangre lacada. Sólo se observó producción de fluorescencia en este medio.

Las veillonellas constituyen una fracción muy importante de la población bacteriana total de las superficies epiteliales de la cavidad oral del hombre y son los anaerobios más numerosos en saliva .En la boca edentula, habitan la lengua y la mucosa bucal y en la boca dentada también están en la placa dental .
La colonización oral con Veillonella spp. es considerada un indicador de salud oral, por su habilidad para neutralizar la acidez local en la placa dental como se ha demostrado en un modelo animal experimental .
Las veillonellas se caracterizan por su metabolismo inusual. Son generalmente incapaces de fermentar los hidratos de carbono, pero crecen bien anaeróbicamente sobre lactato, piruvato, malato o fumarato .
La reducción de la carga acidógena de la placa dental logra al convertir intermediarios metabólicos y productos finales de otras bacterias, tales como ácido láctico y piruvato, en ácidos orgánicos más débiles .Así se han encontrado, en la cavidad oral de niños y adultos libres de caries, proporciones inusualmente elevadas de veillonellas .Estos microorganismos raramente causan infecciones locales o diseminadas, pero cuando se los encuentra, casi siempre es en infecciones polimicrobianas y asociados con condiciones debilitantes .
Las especies de Veillonella figuran entre las primeras colonizantes de la cavidad oral y una vez que han colonizado tienden a persistir en ese ambiente. El requisito para la colonización microbiana inicial es la adherencia bacteriana a las superficies orales. La colonización primaria con Veillonella spp. es independiente de la presencia de dientes erupcionados . La adherencia de Veillonella spp. a los tejidos del huésped y a hidroxiapatita cubierta con saliva es pobre, pero participan en coagregaciones interbacterianas, un modo por el cual se fijan vía la unión secundaria a otras bacterias capaces de la adhesión primaria .

Dado que están involucradas en interacciones beneficiosas en la cascada de colonización oral y en el mantenimiento de la homeostasis, debe conocerse su rol e impacto específico.
Debido a las dificultades prácticas para evaluar el número de microorganismos en la placa dental, se prefiere efectuar los recuentos en saliva, dado que la misma baña todas las superficies y refleja los niveles de microorganismos presentes en la cavidad oral.
Durante el screening de aislamientos clínicos anaeróbicos de rutina, Chow et al. observaron que las colonias de Veillonella spp. regularmente producían fluorescencia roja visible sobre el agar BHI cuando eran expuestas a luz UV de onda larga (366 nm), fenómeno que revertía al ser expuestas al oxígeno atmosférico. Esta propiedad puede ser útil para la identificación presuntiva rápida de este microorganismo .